淺談HPV的分型檢測

【摘要】宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，它是迄今為止唯一找出治病原因的癌癥。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus HPV）的感染是宮頸癌發病的必要條件，99.8%的宮頸癌患者中可以檢測到生殖道HPV病毒的感染。高危型人乳頭瘤病毒的持續感染是導致宮頸癌前病變的及宮頸癌發生、發展的主要因素。

【關鍵詞】人乳頭瘤病毒；宮頸癌；高危型

宮頸癌在女性腫瘤的發生率位居第二，是女性健康的“第二殺手”。據統計，我國每年新增宮頸癌病例約13.5萬。HPV感染在宮頸癌的發生、發展中起到重要的作用。因此，HPV的篩查及高危型HPV的檢測對降低宮頸癌前病變及宮頸癌的發生率十分重要。

一、HPV的結構與分型

 HPV是小環狀雙鏈DNA病毒，在自然界中以裸核休眠狀態存在，即便在無宿主的寒冷條件下HPV也能獨立存活數月，是人類目前所知道的唯一的病毒宿主。HPV為高特殊種群選擇病毒，具有強烈嗜上皮性、高度組織和宿主特異性，可致人類皮膚及黏膜異常增生。基因組分為早期區（E區）、晚期區（L區）和長調控區（LCR）三個功能區。

HPV不能通過免疫學方法進行血清分型，主要通過HPV L1區的DNA雜交及酶譜分析的方法，將DNA同源性小于50%的HPV定義為新亞型。目前已經確認的亞型有100余種，至少有42種能感染人類生殖道上皮細胞。HPV6、11、40、42、43、44、54、61、72和81等型別被認為是低危型，與宮頸大部分良性病變有關；HPV16、18、31、35、39、45、51、52、56、58、59、,68、78和82等型別被認為是高危型，與宮頸癌關系密切。其中HPV16和HPV18型是最常見的高危型HPV。HPV16型多見于宮頸鱗癌，而HPV18型則多見于宮頸腺癌。

二、HPV的感染率和年齡的關系

HPV感染通常是沒有癥狀的，它是世界上第一大傳染疾病。全世界每年有約10－15%的新發病例。HPV的感染因素包括初次性生活的年齡、性伴侶數、吸煙、長期口服避孕藥、免疫缺陷和抑制等。年齡是影響HPV感染率最重要的因素之一。HPV感染率隨年齡分布呈V形，感染率最低的年齡組為30-34歲，兩個高峰分別為20-24歲和40-49歲年齡組。60%以上機體在6個月左右能依靠自身免疫機制逐漸將HPV感染清除；當病毒或宿主的基因發生突變或宿主的防御機制發生缺陷時，則可誘導HPV-DNA片段整合到宿主細胞的DNA上，使得相應基因調控失調，30%以上會發展成宮頸癌。

三、HPV分型的檢測方法

過去，因缺少高靈敏度和特異性的HPV診斷試劑，大約70%的感染者在最初的兩年是無法檢測到HPV的。大部分感染了HPV的婦女將會發展為輕度宮頸損傷，約15%的HPV感染者將會在兩年內發展為重度損傷，而重度宮頸損傷極有可能發展為惡性癌變。

傳統上，宮頸涂片檢測是群體篩查的常規手段，屬于細胞學檢測方法。此方法以觀察作為診斷基礎，受取材、涂片制作質量、閱片技術影響，其準確率低，假陰性高，重復性差，漏診率可達30%。在檢查和篩選HPV的基因型方法中，實時熒光PCR法及雜交捕獲法最為常用，但是實時熒光PCR法所需要的設備比較昂貴，且操作繁瑣，不適合于對子宮頸癌的大規模篩查。雜交捕獲法試劑盒無須PCR擴增即可檢測出臨床樣品中的HPV DNA，并且可區別高危型和低危型兩類，但是此類試劑盒無法鑒定出感染HPV的具體基因型。

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。聚合酶鏈反應（PCR）是一種先進的基因檢測技術，具有高度敏感性、特異性、快速、簡便等特點。通過對病變組織或可疑部位樣品提取DNA，利用特異引物對目標DNA進行擴增。當某種病原微生物含量極少時，傳統的檢測方法難以檢出，但通過PCR技術可將DNA片斷擴增到百萬倍以上，能精確檢測出病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強，及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物，判斷藥物療效如何，有利于各種感染性疾病的病原學診斷，從而為臨床治療提供可靠的檢驗依據。

我院檢驗科PCR實驗室于2016年8月購進了獲得美國專利技術的Hybribio雜交儀和SLAN-96S擴增分析儀，正式啟動HPV分型檢測項目，利用熒光PCR方法進行21分型和12+2分型檢測。標本為宮頸分泌物（女性）和尿道分泌物（男性）。由于標本量較多，檢驗科指派三名專業技術人員每天進行HPV分型檢測，為廣大患者提供準確及時的檢驗服務，也熱忱歡迎各位的咨詢和指導。咨詢電話：0891-6928269。